Vaccination med porcilis app mod ondartet lungesyge hos slagtesvin

SAMMENDRAG

Den kliniske effekt af Porcilis APP er undersøgt i 2 svinebesætninger. Afprøvningen kunne ikke videreføres i endnu 2 besætninger som planlagt. Årsagen var at der ikke kunne findes besætninger, som opfyldte undersøgelsens forudsætninger om en dødelighed på 4% som følge af ondartet lungesyge.

Afprøvningen viste en beskyttende effekt ved vaccination med Porcilis APP på pleuritis i den ene besætning. I begge besætninger kunne påvises en reducerende effekt på arindtrækning hos vaccinerede grise.

På grund af lav forekomst af ondartet lungesyge i observationsperioden i de to besætninger kunne der ikke påvises effekt på dødelighed, behandlingsfrekvens eller daglig tilvækst.

BAGGRUND

Ondartet lungesyge hos svin forårsaget af Actinobacillus pleuropneumoniae (Ap) er en vidtspredt tabsvoldende sygdom. Sygdommen rammer især slagtesvin og er kendt over det meste af verdenen.

Der er i dag identificeret 13 forskellige serotyper. De 13 Ap serotyper har varierende virulens. De højvirulente serotyper giver anledning til perakutte og akutte tilfælde med høj morbiditet og mortalitet. I besætninger der er kronisk smittet med en højvirulent serotype eller smittet med mere lavvirulente serotyper ses forhøjet mortalitet og øget frekvens af utrivelige grise. I Danmark er ondartet lungesyge almindeligt udbredt og det er især serotyperne 2,5 og 6 der forekommer. Den økonomiske betydning er omkostninger i forbindelse med den forhøjede mortalitet, øgede medicinforbrug samt dårligere produktivitet.

De kommercielle vacciner, der hidtil har været tilgængelige, indeholder inaktiveret Ap bakterier. Sådanne vacciner inducerer generelt begrænset beskyttelse og beskyttelsen er primært rettet mod homologe serotyper (serotypespecifik).

Øget forståelse af virulensfaktorer og immunogene elementer hos forskellige serotyper har muliggjort udviklingen af en ny type vaccine mod ondartet lungesyge hos svin.

Hos Ap er der fundet 3 toxiner af betydning for udvikling af ondartet lungesyge hos svin.

Disse betegnes Apx I-III. Derudover er et fjerde protein, OMP, fundet at have betydning for immunitet. Infektion med en vilkårlig serotype af Ap medfører en serologisk reaktion mod 1,2 eller 3 af Apx-toxinerne samt OMP.

Porcilis APP indeholder toxoideret (afgiftet) subunits af Apx I-III samt OMP. Apx I-III samt OMP udvindes fra Ap serotype 1, 2 og 5b. De oprensede antigener er opløst i en vandig adjuvans, Diluvac Forte (dl- -tocoferol acetat), som giver høje antistoftitre og minimal vævsreaktion. Som konserveringsmiddel er tilsat formalin.

Porcilis APP har ved eksperimentelle undersøgelser vist at yde beskyttelse mod de almindeligst forekommende serotyper. Udenlandske afprøvninger i felten har ligeledes vist, at vaccinen er effektiv til at reducere dødelighed og patologiske forandringer forårsaget af serotyperne 2, 7 og 9.

FORMÅL

Formålet har været at gennemføre en klinisk afprøvning for at vurdere reduktion af dødelighed ved vaccination med Porcilis APP i danske besætninger med et klinisk erkendt ondartet lungesyge-problem.

MATERIALE OG METODER

Design

Den kliniske afprøvning var designet til at blive gennemført som et dobbelt blindet randomiseret blokforsøg i 4 integrerede so- og slagtesvinebesætninger (mindst 200 årssøer) med et klinisk erkendt Ap problem. Besætningerne måtte ikke anvende foder- og vandmedicinering til grise over 6 uger, skulle have salmonella-status på niveau 1, ingen erkendte PRRS sygdomsproblemer og en dødelighed som følge af ondartet lungesyge på min. 4%. Ap af en kendt serotype skal være isoleret fra besætningen. Det tilstræbes at serotyperne 2,5 og 6 repræsenteres i afprøvningen.

Det viste sig vanskeligt at finde besætninger, der kunne matche de opstillede inklusionskriterier. Besætninger med en dokumenteret dødelighed som følge af ondartet lungesyge på mindst 4 % viste sig trods gentage efterlysninger uhyre vanskelig at finde.

Afprøvningen blev derfor kun gennemført i 2 besætninger.

6 ugers grise blev fordelt tilfældigt i hhv. vaccinations- og placebogruppe (farvekodet), vejet, øremærket og vaccineret. Grisene blev revaccineret efter ca. 4 uger. Inden afgang til slagteri blev grisene vejet 2. gang og tatoveret med leverandørnummer samt et undernummer, der angav farvegruppe.

Registreringer: Grise døde inden slagtning (død af ondartet lungesyge/andet).

Antibiotikabehandlinger.

Vægt ved 1.vaccination/afgang.

USK (brysthindear/Ap-forandringer/ukompliceret og kompliceret almindelig lungesyge).

Som den primære effektparameter er valgt et fald i dødelighed hos grise vaccineret med Porcilis i forhold til placebogruppen. Der forventes en effekt svarende til en reduktion på 75% af Ap-relaterede dødsfald blandt ung- og slagtesvin (inkl. kasserede).

Sekundære parametre for effekt er: Reduktion i antal injektions antibiotika-behandlinger.

Reduktion i gns. omfang og antal af brysthindear.

Reduktion i omfang og antal af Ap-processer.

Forbedring af daglig tilvækst.

Parametrene betegner forskelle mellem grise vaccineret med Porcilis APP og placebo.

STATISTISK METODE

Ved opgørelserne af dødelighed, behandlingsfrekvens og lungeforandringer er er der anvendt linear mixed models. Glimmix-makroen (SAS Inst.) er anvendt til analysen. Startdatoen er indsat som en tilfældig effekt (hold effekt) , og gruppe er fixed effekt.

Daglig tilvækst er beregnet som forskel i indgangsvægt og udgangsvægt delt med forskellen i indgangsdato og udgangsdato. Der er anvendt en lineær regressionsmodel (proc mixed; SAS Inst.) med gruppe, indgangsvægt og køn som fixed effekt. Startdatoen er indsat som en tilfældig effekt (holdeffekt) og gruppe effekten er tilladt at variere mellem startdatoer (tilfældig effekt af interaktionsled mellem gruppe og startdato).

Analyserne er gennemført for hver af de 2 besætninger. Resultaterne fra de 2 besætninger har enten været klart forskellige, eller signifikante for hver besætning for sig, så der blev ikke vundet yderligere styrke i undersøgelsen ved at foretage en samlet analyse.

BESÆTNINGER I AFPRØVNINGEN

Den kliniske afprøvning blev startet op i 2 besætninger.

Besætning 1:

Besætningen har 270 søer og sundhedsstatus SKM + Ap2. Besætningen har gennem længere tid haft perioder med kliniske tilfælde og mange dødsfald som følge af ondartet lungesyge. Besætningen blev inkluderet i afprøvningen efter påvisning af Ap 2.

Besætning 2:

Besætningen har 550 årssøer og sundhedsstatus blå MS + Ap6. Besætningen har hidtil vaccineret med Pleurinord 2+8 med rimelig effekt. Tidligere ophør af vaccination har resulteret i massiv opblussen af kliniske tilfælde af ondartet lungesyge inklusiv dødsfald. Efter verifikation af diagnosen (påvisning af Ap6) blev det besluttet at besætningen skulle ophøre med Pleurinord 2+8 vaccination og deltage i afprøvningen.

RESULTATER

Efter afslutning af afprøvningen i besætningen blev farvekoden brudt. Grise i vaccinationsgruppe G (grøn) var vaccineret med Porcilis APP mens grise i vaccinationsgruppe R (rød) havde fået placebo. Dette gælder for begge besætninger.

I tabel 1 er vist resultatet af de statistiske analyser.

Den primære effektparameter var dødelighed. Der blev ikke fundet nogen sikker effekt af vaccinen på dødelighed.

For de sekundære effektparametre blev der fundet en sikker effekt på arindtrækninger i begge besætninger. Der blev fundet en sikker effekt på brysthindear totalt og brysthindear i de forreste lungelapper i besætning 1, og en tendens for brysthindear i de bagerste lungelapper i besætning 1. Forekomsten af brysthindear i besætning 2 er væsentlig lavere end i besætning 1. Den manglende effekt i besætning 2 kan derfor tilskrives en lav forekomst i både forsøgs-, og kontrolhold.

Der blev ikke fundet nogen effekt på daglig tilvækst, behandlingsfrekvens, ukompliceret almindelig lungesyge og kompliceret almindelig lungesyge.

Tabel 1.

Parameter	Besætning	Vaccinegruppe	Kontrolgruppe	P-værdi
Dødelighed i procent	1	6,4 % (total 712 grise)	7,8 % (total 651 grise)	0,36
	2	3,6 % (total 639 grise)	4,1 % (total 603 grise)	0,58
Daglig tilvækst. (differencen mellem vaccine og kontrol)	1	+0,76 G/dag	0 g/dag	0,88
	2	-5,70 G/dag	0 g/dag	0,20
Behandlingsfrekvens (% behandlet totalt)	1	8,3 %	7,2 %	0,56
	2	Ingen	Ingen	-
Ukomplic. alm. lungesyge (% lunger med forandringer)	1	40 %	39 %	0,72
	2	21%	22 %	0,72
Komplic. alm. lungesyge (% lunger med forandringer)	1	1,5 %	1,6 %	0,78
	2	1,9 %	1,1 %	0,35
Ukomplic. og komplic. almindelig lungesyge samlet (%lunger med forandringer)	1	41 %	39 %	0,96
	2	22 %	22 %	0,88
Ar-indtrækninger (% lunger med forandringer)	1	3,1 %	9,2 %	0,002
	2	4,1 %	9,2 %	0,02
Brysthindear i bagerste lungelapper (% lunger med forandringer)	1	55 %	62 %	0,10
	2	11 %	13 %	0,44
Brysthindear i forreste lungelapper (% lunger med forandringer)	1	20 %	31 %	0,02
	2	10 %	11 %	0,93
Total brysthindear (% lunger med forandringer)	1	57 %	69 %	0,02
	2	16 %	16 %	0,95

DISKUSSION

I forbindelse med dimensionering af denne afprøvning var der følgende forudsætninger:

Der ønskedes at påvise en 75 % reduktion i dødelighed som følge af ondartet lungesyge. Styrken i afprøvningen skulle være 80 %. Stikprøvestørrelsen blev beregnet til 2 gange 2655 grise ved et fald i dødeligheden fra 4% til 1%. Beregningerne på stikprøvestørrelsen er baseret på et enkeltsidet testniveau på 5 %. Den oprindelige protokol inkluderer altså ca. dobbelt så mange grise i hver af de 2 vaccinationsgrupper som der endte med at deltage. I det oprindelige design er beskrevet ønsket om en afprøvning i 4 besætninger. Afprøvningen blev kun gennemført i 2 besætninger.

Inklusionskriteriet “Minimum 4 % dødelighed som følge af ondartet lungesyge” viste sig meget hurtigt vanskeligt at honorere. For at eftervise at Porcilis APP kan reducere denne variabel med 75 % kræves at dødeligheden kan holdes på dette høje niveau gennem hele observationsperioden dvs. ca. 7 måneder i den enkelte besætning. Dette viste sig umuligt under praktiske forhold. En af forklaringerne er det kendte fænomen ved afprøvninger af vacciner, at smittepresset i kontrolgruppen sænkes som følge af vaccination af forsøgsgruppen.

Ved opgørelse af de foreløbige resultater fra de 2 besætninger afprøvningen var startet op i, sås at den ønskede dødelighed som følge af ondartet lungesyge var meget lav, trods det faktum at besætningerne var valgt som følge af en høj dødelighed.

Det blev besluttet at stoppe afprøvningen efter de 2 besætninger og lave denne opgørelse på baggrund af resultater fra disse.

Af resultatafsnittet fremgår, at der ikke blev fundet effekt på den primære parameter, total dødelighed. Der er en forskel på niveauet besætninger imellem, men ikke på om grisene er vaccineret med Porcilis APP eller ej.

Samme billede gør sig gældende for daglig tilvækst.

Det viste sig at besætning 2 ikke havde nogen behandlinger mod lungelidelse i observationsperioden. I besætning 1 var der ingen forskel i behandlingsfrekvensen de 2 grupper imellem.

Ved opgørelse af data fra USK i besætning 1 havde grise vaccineret med Porcilis APP en 0,7 gange så lav en risiko for at få brysthindear end grise der ikke var vaccineret. For denne effekt var der en p-værdi på 0,10. Resultat ved opgørelsen af brysthindear i besætning 2 viser ikke så stor forskel (tabel 1) men tendensen er den samme; lavere risiko for brysthindear i de bagerste lungelapper når grisen er vaccineret med Porcilis APP.

KONKLUSION

Ved afprøvning af Porcilis APP i 2 besætninger vistes en delvis beskyttende effekt ved vaccination på pleuritis i besætning 1 (fra 69 % til 57 %, p=0,02).

Der kunne ikke i denne afprøvning vises effekt på dødelighed behandlingsfrekvens eller daglig tilvækst som følge af ondartet lungesyge .

Afprøvningen blev stoppet da ca. halvdelen af grisene i det oprindelige design var inddraget. Årsagen var, at det viste sig umuligt at finde besætninger med en vedvarende dødelighed på 4% som følge af ondartet lungesyge som krævet i protokollen.

Denne afprøvning var planlagt til at skulle gennemføres i 4 besætninger. Det viste sig kun muligt at gennemføre afprøvningen i 2 besætninger. Der kunne ikke påvises en effekt på den primære parameter “dødelighed” i de 2 besætninger, hvor afprøvningen blev gennemført.

Denne afprøvning kan ikke udelukke en gunstig effekt af vaccinen i andre besætninger.